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아가로스 젤 전기영동 후 DNA 밴드를 확인하는 과정
아가로스 젤을 만들때 넣어준 DNA 염색약은 나노 수준 물질로서 UV를 반사시킨다.
젤 전기영동이 끝난 후 젤에 머물러 있는 DNA 조각들은 염색약과 결합되어 있으며 UV를 쬐어 주면 반사되므로 DNA의 존재를 간접적으로 확인할 수 있다.
DNA 마커를 같이 전기영동하여 시료 DNA와 비교하면 시료 DNA의 대략적인 크기와 양을 확인할 수 있다.
젤의 각 홈에 로딩한 DNA는 크기가 매우 작고 동일한 크기를 가지고 있으며 전류를 흐르게 하면 수많은 DNA 조각들이 동일한 속도로 움직이므로 DNA 조각들은 홈과 같이 가로의 밴드로 보이게 된다.
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agaroae 전기영동 결과 분석좀 해주세여ㅠㅠㅠ > BRIC
실험결과 분석이 어려워서요ㅠㅠㅠㅠㅠ 도와주세요 사용 시약은 dna Nedl EcoRV DEPCwater load…
Source: www.ibric.org
Date Published: 8/20/2022
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전기 영동 결과 고찰 | How To Dna Gel Electrophoresis
d여기에서 How to DNA Gel Electrophoresis | Agarose gel | DNA 전기영동법 | 서울대 생화학 실험 조교의 실험강의 – 전기 영동 결과 고찰 주제에 …
Source: you.xosotanphat.com
Date Published: 5/11/2021
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[생물학]PCR 결과 확인(전기영동) – 네이버 블로그
판매하고 있는 marker의 band에 대한 정보로부터 PCR 산물이 약 750bp정도 되는걸 확인 할 수 있다. 6. 고찰. DNA 추출과 PCR을 통하여 실제 전기영동으로 …
Source: m.blog.naver.com
Date Published: 2/21/2022
View: 2501
전기영동 실험 결과 해석
이번 실험에서는 다양한 종류의 전기영동 방법 중 gel을 쉽게 만들 수 있는 Agarose gel 전기 영동을 이용해서 주어진 Sample DNA를 분리하도록 했다.
Source: cccforone.tistory.com
Date Published: 7/30/2022
View: 6684
전기영동의 원리와 실험
1. 어떻게 아가로스 겔 전기영동이 DNA를 분리 시키는가? 2. 샘플 F의 결과에서 어떤 결론을 얻을 수 있는가? 3. 버퍼용액 대신에 챔버용액 혹은 겔 용액에 …
Source: local.koreasci.com
Date Published: 9/28/2021
View: 8944
전기 영동 결과 고찰 | How To Dna Gel Electrophoresis
d여기에서 How to DNA Gel Electrophoresis | Agarose gel | DNA 전기영동법 | 서울대 생화학 실험 조교의 실험강의 – 전기 영동 결과 고찰 주제에 …
Source: you.1111.com.vn
Date Published: 4/23/2022
View: 4044
PCR 전기영동 결과레포트 – 해피캠퍼스
고찰 이번 실험은 큰 분자인 DNA를 전기적인 힘을 이용하여 겔에서 이동시켜 크기에 따라 서로 분리하는 실험을 하였다. 우리 조에서는 O형의 혈액 …
Source: www.happycampus.com
Date Published: 7/12/2021
View: 5203
DNA 전기영동 결과레포트 (DNA 전기영동하기, Agarose 만들기)
1) DNA 전기영동하기! 2) Agarose 만들기. Agarose 1% 50ml 만들기 고찰. 본문내용. DNA전기영동 결과레포트 1 …
Source: m.reportworld.co.kr
Date Published: 10/25/2022
View: 4544
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주제에 대한 기사 평가 전기 영동 결과 고찰
- Author: 우쌤의 생명과학 실험
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- Date Published: 2021. 4. 12.
- Video Url link: https://www.youtube.com/watch?v=6kW5ErfvK6o
agaroae 전기영동 결과 분석좀 해주세여ㅠㅠㅠ
저 데이터로 뭐 분석하라면 아무도 못합니다.
NedI, EcoRV 제한효소고… 벡터를 잘랐다면 벡터 정보를 줘야지요.
벡터 정보가 있으면 각 효소가 짤리 부분을 체크하여 나오는 벡터절편들의
사이즈가 얼마인지 확인하시고 DNA 래더에서 나타내는 사이즈와 일치하는지 확인하면 됩니다.
1. 벡터의 전체 크기를 알아내라.
2. 짤린 부위의 위치를 체크하라.
3. 짤린 부위의 위치를 통하여 각 절편의 길이를 체크하라.
4. 체크된 벡터절편의 사이즈가 겔로 내렸을 때 자신이 예상한 길이와 일치하는지 확인하라.
이정도 실험 수준이면….해석이 매우 쉬운 수준입니다…
자신이 무슨 실험을 했는지 안다면 해석이 어려울 이유가 전혀 없습니다.
자신이 뭘 했는지도 모르니까 해석이 어렵다고 느끼는 겁니다…
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[생물학]PCR 결과 확인(전기영동)
Ⅰ. 실험 목적
DNA의 PCR결과를 전기영동을 통해 확인한다.
Ⅱ. 배경지식
1. PCR의 원리
PCR은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA 분자의 어느 부분이든지 프라이머 서열만 알면 PCR을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 DNA의 변성, 프라이머의 결합, DNA의 신장 세단계로 구성되어 있고, 이 과정을 반복하면서 DNA가 증폭된다.
2. PCR의 과정
DNA의 변성, Primer의 결합, DNA의 신장, Cycle의 반복으로 되어있다.
3. PCR의 Product
주형 DNA인 증폭 대상이 되는 DNA와 프리믹스로 유전자를 합성하는 재료가 되는 뉴클레오티드등의 화합물이 있으며, 프라이머로 증폭할 부분을 인식하는 짧은 올리고뉴클레오티드서열과 DNA Polymerase인 Taq 중합효소가 있다.
4. PCR의 확인(전기영동)
PCR 증폭산물의 해석에 우선적으로 실시하는 방법이다. 증폭 DNA의 유무 및 비특이적 증폭 DNA이 유무를 해석하는데 사용한다. DNA 겔 전기영동은 DNA를 50V~100V 정도의 전류 장치에 흘려보내면서 크기에 따라 분리하는 방법이다. DNA는 기본골격에 있는 인산기 때문에 전기영동에 사용되는 완충용액속에서 (-)전하를 띄고 있어 (+)극 쪽으로 움직이게 된다.
5. PCR의 응용
PCR은 유전자지도의 작성, 인간유전체 연구에서 염기서열 분석, 친자확인, 범인 식별 등 genetic finger printing을 이용한 법의학 분야, 멸종된 과거 생물이나 현존 생물의 상호 유연관계를 규명하는 유전적 구성을 분석하는 진화 생물학, 돌연변이 분석, 유전병 진단 등 다양한 분야에서 활용되고 있다.
3. 가설설정
추출한 DNA로부터 marker에 맞는 pattern들이 관찰될 것이다.
4. 실험
1. 실험 재료
1-1. PCR 결과 확인
PCR product, DNA 추출액, 삼각 플라스크, 전기영동 장치, gel cast, comb, tip, micropipet, marker(1kb DNA ladder hind3), 2㎕ loading dye, 전자레인지, 1.8% gel, 0.8% gel, 일회용비닐장갑
2. 실험방법
2-1. 1.8% gel 만들기
약포지를 저울위에 올려 놓은 후 전원을 켜, 0.00g에 맞추고, 0.18g agarose를 잰다.
1에서 잰 agarose를 삼각 플라스크에 넣은 후 , Red safe가 참가된 TAE buffer 10ml를 담고 플라스크 입구에 랩을 씌운다.
면장갑 착용 후 agarose가 들어 있는 플라스크를 전자레인지에 1차로 20초 가열한 뒤 꺼내어 잘 섞이게 흔들어 준 후, 다시 20초 가열한다
기포가 생기지 않도록 조심히 흔들어 주면서 5분동안 식힌 후 gel cast에 담아 15분 동안 굳힌다
2-2. 전기영동
1. 직접 만든 1.8% gel에는 ladder marker 3㎕를 첫 번째 well에 넣고 PCR product 3㎕를 두 번째 well부터 순서대로 넣는다.
2. 미리 준비된 0.8% gel 에는 Hind3 marker ㎕를 첫 번째 well에 넣고 DNA 추출액 5㎕를 2㎕ loading dye tube에 넣어 혼합한후 두 번째 well로부터 5㎕씩 순서대로 넣는다.
3. 전기영동장치 전원코드를 연결하고 뚜껑 홈이 금속에 잘 들어가도록 맞춰 넣은 후 100V에서 26분간 전기영동한다.
4. 시간이 되면 전기영동 장치의 전원을 끄고, 코드를 뺸다.
5. 일회용 비닐장갑 착용후 gel이 gel cast에서 분리되지 않도록 주의하면서 UV lamp로 갖고 나온다.
7. 관찰이 끝나면 UV lamp의 전원을 끄고, 관찰한 gel은 바로 일회용 비닐장갑에 싸서 버린다.
5. 결과
1.추출한 DNA
0.8% gel을 이용하여 전기영동한 DNA 추출물이다. 그림에 표시한것처럼 아래에 gel의 well부분들이 있고, (-)극인 아래에서 (+)극인 위로 전기영동을 하였다(DNA의 인산기의 음전하의 반발력과 인력을 이용). 1번 well 부분에 marker DNA를 넣었고 2,3번에 추출한 DNA를 넣었다. UV결과로부터 약 2027bp값을 확인할 수 있다(marker가 전기영동된 값과 비교했을 때, 주어진 marker의 값을 이용하여 해당 DNA의 band의 길이를 추정).
2. PCR 결과
위의 사진은 1.8% gel을 이용하여 PCR 산물을 전기영동한 사진이다. 왼쪽에 (-)극을 걸어줬고, 오른쪽에 (+)극을 걸어줬다. 왼쪽 well에서부터 오른쪽으로 전기영동되었으며, 1번 well 부분에 marker DNA 그리고 표기한 2번 well에 PCR product를 투여했다. 판매하고 있는 marker의 band에 대한 정보로부터 PCR 산물이 약 750bp정도 되는걸 확인 할 수 있다.
6. 고찰
DNA 추출과 PCR을 통하여 실제 전기영동으로 우리가 제대로 검출했는지에 대해서 가시적으로 확인할 수 있었다. in vitro에서 많은 양을 증폭하였는데, 실제로 우리조와 앞조에서 얻은 PCR product로 부터는 선명하게 전기영동된 product를 얻진 못하였다. 내 생각엔 지난주에 denaturation과 annealing과정에서 온도조절에 제대로 되지 않았던것같다. 다른조원들과 함께 실험하였기 떄문에 가열기의 뚜껑이 열려져있는 상태로 지속되었고, 정확한 시간만큼의 항온수조 상태를 유지하지 못했다. 사실 PCR과 전기영동은 DNA의 특정 원하는 부분을 증폭하는 방법인데, PCR 진행 후 우리가 원하는 절편이 제대로 증폭됬는지에 대한 여부를 확인하고 비특이적으로 증폭된 찌꺼기들을 제거하기 위해서 칼로 특정부분의 agar를 도려낸후 다시 녹여서 DNA가 정확한지 서열비교를 해보아야한다. 더불어 여러 가지 DNA가 섞일 경우도 고려했을떄 marker와 함께 internal control을 이용하여 보통 모든 세포에서 동량 발현되는 것들을 이용해서 서로 같은양의 샘플을 사용했음도 비교해주어야한다.
7. 인용문헌
1 Biology 2권, 박선우, 피엠디아카데미, 2014년 12월 254~274,330~337
14주차 실험 주요어(Key Word)
1. 동물의 기관계
2개 이상의 기관이 기능적으로 공통성을 가지고 협동하여 작용하는 일련의 계통을 기관계라한다.
2. 기관계의 종류와 기능
1. 피부기관계: 상해, 탈수 일부 병원체로부터 신체를 보호
2. 신경기관계: 외부와 내부의 자극을 탈지, 자극에 대한 반응을 통제
3. 근육기관계: 신체와 내부 부분을 움직이고 자세 유지에 관여
4. 골격기관계: 신체 각 부분을 지지하고 보호하여 근육의 부착 부위를 제공
5. 순환기관계: 세포 사이에서 수많은 물질을 신속하게 운반
6. 내분비기관계: 신체 기능을 호르몬으로 조절하고 신경계와 연결되어 신체활동에 관여
7. 림프기관계: 조직액의 일부를 모아 혈액으로 되돌리고, 감염과 조직 손상에 대하여 방어
8. 호흡기관계: 새포를 담그고 있는 조직액으로 산소를 신속하게 전달
9. 소화기관계: 음식물과 수분을 섭취
10. 배설기관계: 내환경의 부피와 조성을 유지하고 노폐물 배설
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PCR 전기영동 결과레포트 레포트
소개글 혈액을 이용하여 DNA를 PCR 전기영동 실험한 결과 레포트입니다.
여러가지 방면으로 정보를 찾아 쓴 레포트라고 칭찬 받았던 A+을 받은 레포트입니다.
또 사진이 첨부가 되어 큰 도움이 될 것입니다.^^
목차 -결과
-고찰
본문내용 -고찰
이번 실험은 큰 분자인 DNA를 전기적인 힘을 이용하여 겔에서 이동시켜 크기에 따라 서로 분리하는 실험을 하였다. 우리 조에서는 O형의 혈액으로 PCR과 전기영동 실험을 하였다. 정상적인 실험이 이루어졌다면 Sample A에서는 제한 효소인 KpnⅠ에 의해 261염기인 G가 삭제되고 DNA가 끊어진다. 따라서 468bp에서는 band가 보이지 않고 295bp와 173bp에서만 band가 보였을 것이다. 그러나 실험결과 500bp와 가까운 곳에서만 희미한 band가 보이는데 이는 여러 가지 이유가 있을 것으로 추측된다.
첫 번째로 전체적으로 제한효소에 의한 DNA의 cutting이 제대로 이루어지지 않았을 경우로 추측할 수 있다. DNA가 슈퍼코일이 되어 제한효소가 작용점에 대한 접근성이 떨어졌다거나 다른 어떤 것과 이온결합을 하고 있어 제한효소가 제대로 작용하지 못하였을수도 있다.
두 번째로는 468bp에 나타난 band는 오차로 인한 band로 추측된다. DNA는 제한효소에 의해 100% 잘리지 못하고 어느정도의 오차가 생길 수 있다. 468bp의 밴드가 매우 희미한 것을 보아 오차로 발생한 468bp에서만 band로 희미하게 나타나게 되고 나머지 DNA들은 제대로 cutting이 되었지만 DNA양이 너무 적었거나 그 외의 요인으로 인해 295bp와 173bp에서 band의 세기가 약하여 잘 보이지 않는 상황이 발생한 것으로 추측할 수 있다.
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